外泌體作為細胞外囊泡的一個亞群, 直徑集中于30~150 nm。目前, 基于粒徑大小分離外泌體的方法有超濾法、尺寸排除色譜法、靜水過濾透析法和非對稱場流分離法等。超濾法利用不同孔徑的濾膜, 對樣品進行選擇性分離以獲得外泌體, 一般分為壓力超濾和離心超濾。其中離心超濾效果更好, 不jin能減輕力對外泌體的破壞, 而且可通過增大離心力和延長離心時間提高外泌體產物濃度。但離心力過大或離心時間過長均有可能導致超濾膜或外泌體破裂。此外, 超濾法可以和切向流過濾法、微控流法、超速離心法或凝膠過濾色譜法等方法結合進一步提高分離效率。外泌體被認為是疾病的生物標志物和預后因子，具有重要的臨床診斷和治理意義。湖南腹膜透析液外泌體染色PKH67/PKH26

瘤轉移是病癥致死的首要原因。長久以來，對瘤轉移機理的研究一直聚焦于瘤與機體之間的相互作用。然而在近年來，由于外泌體被發現可以作為包括瘤在內細胞之間信息傳遞的一種新方式，瘤轉移研究領域再度變得火熱起來。我所（瘤轉移的預警和預防研究所）以謝曉東博士為首的外泌體研究小組一直致力于研究瘤轉移與外泌體之間的聯系，已取得一系列成果。外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質的小膜泡(30-150nm)，現今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。多種細胞在正常及病理狀態下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體，經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。湖南腹膜透析液外泌體染色PKH67/PKH26干細胞外泌體對多種類型的免疫細胞均具有免疫調節作用。

事實上，動物實驗表明：在小鼠急性心肌梗塞術后，注射來源于間充質干細胞、心臟祖細胞、胚胎干細胞或心肌源性細胞的外泌體均可改善心臟功能，減輕心臟纖維化，刺激血管生成。例如，心源性細胞外泌體能通過特異性的巨噬細胞極化為急性心肌梗死提供心臟保護作用。心臟再灌注后，CDCexo的輸注降低了大鼠和豬心肌梗死模型的梗死面積，而且CDCexo會減少梗死組織內CD68+巨噬細胞數量，并改變巨噬細胞的極化狀態。自體CD34+干細胞的移植可以改善缺血組織再灌注后的功能，并降低嚴重肢體缺血患者的截肢率。其作用機制在于：CD34+干細胞分泌的外泌體促進小鼠下肢缺血模型血管生成。雖然臨床前研究的證據表明干細胞釋放的外泌體可以作為心肌修復的潛在無細胞治理劑，但是，目前將外泌體完全用作心臟修復治理劑之前還是有很多重點問題需要解決。

在運輸DOX的研究中，Wei等選擇了已經在臨床上使用的未成熟的樹突細胞作為母代細胞，通過化學轉染使其分泌的外泌體表面含有Lamp2b，這種蛋白可以與αv整合蛋白特異性iRGD肽結合，使外泌體對DOX的運輸具有靶向性。將對iRGD肽靶向的外泌體和未經靶向性處理的外泌體用DiR染料標記，并分別靜脈注射入移植了人乳腺ai細胞的小鼠體內，觀察到靶向的外泌體在注射30min后已經出現在中流組織處，在注射2h后外泌體的含量高，而未經靶向性處理的外泌體在注射后主要集中在肝臟，幾乎很少到達中流組織處，說明對iRGD肽靶向的外泌體具有很好的靶向性。外泌體作為腦內種瘤和神經退行性疾病的新型標記物。

外泌體含有的信號分子能反映分泌細胞的生理狀態和功能狀態,甚至還會包含細胞病態相關的分子信息,從而提供了豐富的潛在的生物標志物分子源。瘤細胞分泌的外泌體通過對大分子物質的轉移和傳遞調節臨近或遠處瘤生長的微環境,對促瘤生成及瘤增生、轉移發揮著不同的調節作用。瘤細胞分泌的外泌體還可以通過誘導耐藥和免疫抑制來促進瘤的發展。外泌體能在4℃保存96h,或是在-70℃下保存更長時間,這些特點使得外泌體可應用于瘤的早期診斷和預后判斷。靶向瘤的外泌體的標志物可能為瘤疾病的診斷和治理提供新的指標和途徑,對高危人群早期診斷和早期治理以降低或減緩瘤病例的發生上發揮著重要的作用。外泌體本身的惰性相當高，但它們與細胞膜融合可將所攜帶的物質和信號傳遞到受體細胞并改變其生物學功能。湖南腹膜透析液外泌體染色PKH67/PKH26

從外泌體中篩選的生物標志物，可用于疾病的診斷、預后及治理。湖南腹膜透析液外泌體染色PKH67/PKH26

Vlassov等人發表的一篇外泌體的提取方法及組成的專利文獻中介紹，通過終濃度為8%的PEG6000與生物體液共孵育14h后，10000xg離心1h，可將直徑在30-150nm之間，且包含豐富RNA的外泌體沉淀下來。因此采用終濃度為8%的PEG6000沉淀血清中的外泌體，為了進一步純化胎盤相關外泌體，將獲得的包含外泌體的沉淀用PBS重新懸浮后，加入非線性蔗糖密度梯度層，10000xg超速離心5h，將分層液采用PEG6000進行2次沉淀。經過多次實驗反復驗證，確定同時表達外泌體標志蛋白分子及胎盤特異性蛋白分子的胎盤來源外泌體所在密度層。湖南腹膜透析液外泌體染色PKH67/PKH26