MSI-H結(jié)直腸ai的比例(22％)高于Ⅲ期結(jié)直腸ai(12％)，而在Ⅳ期liu中*占％，提示MSI-H結(jié)直腸ai發(fā)生轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)較低。特別是在Ⅱ期結(jié)直腸ai患者中，MSI狀態(tài)是提示預(yù)后的**預(yù)測因子，MSI-Hliu預(yù)后好于MSSliu。Ⅱ期結(jié)直腸ai復(fù)發(fā)的高危因素包括：liu組織學(xué)類型為低分化ai、有脈管／神經(jīng)侵犯、淋巴結(jié)檢出數(shù)量不足12個、發(fā)生梗阻或穿孔以及切緣陽性，但如liu為MSI-H型，則低分化不屬高危因素。2．指導(dǎo)***：研究發(fā)現(xiàn)，MSI-H結(jié)直腸ai對5-氟尿嘧啶和順鉑等化療藥物不敏感，而對伊立替康等化療藥物敏感，同時MSI結(jié)直腸ai對放療比較敏感。美國國立綜合ai癥網(wǎng)絡(luò)(NCCN)的結(jié)直腸ai臨床實(shí)踐指南明確指出，對MSI-H結(jié)直腸ai不宜采用5-氟尿嘧啶和鉑類為主的***方案。3．Lynch綜合征患者篩查：Lynch綜合征患者較常見同時性或異時性多發(fā)結(jié)直腸ai，如果術(shù)前能明確Lynch綜合征的診斷，外科醫(yī)師有可能采取更為***的切除術(shù)式。Lynch綜合征患者不*發(fā)生結(jié)直腸ai的風(fēng)險(xiǎn)增高，而且可以發(fā)生子宮內(nèi)膜ai、卵巢ai、尿路上皮ai等多種腸外惡性liu，有研究表明，阿司匹林能夠預(yù)防Lynch綜合征相關(guān)結(jié)直腸ai及腸外liu的發(fā)生。由于Lynch綜合征與大家熟知的家族性腺瘤**肉病(FAP)不同。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)與全球品牌藥企廣f泛展開伴隨診斷產(chǎn)品的開發(fā)合作，已有多個診斷產(chǎn)品上市。黑龍江作用dMMR抗體檢測試劑口碑推薦

    atccnumbercrl-8287)以5:1比例混合，離心1500rpm，5min。棄上清后離心管放入37℃水浴中，在1分鐘內(nèi)緩慢加入1ml的peg1500(roche公司)，并攪動細(xì)胞。在溫水中靜置1min后，加入10ml無血清的imdm(sigma公司)，混勻，離心1000rpm，5min。棄上清后，加入10ml血清(paa公司)小心的將細(xì)胞吹打起來，并加入5ml混合10xhat(sigma公司)的胸腺細(xì)胞，混勻。再加入25ml含有％硝基纖維素(sigma公司)的半固體培養(yǎng)基充分混勻，然后均勻的倒入20個細(xì)胞培養(yǎng)皿中。將細(xì)胞培養(yǎng)皿放入到濕盒中，放入37℃5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。三、克隆化及elisa篩選陽性雜交瘤細(xì)胞：融合后11天，克隆細(xì)胞團(tuán)大小密度適中，在解剖鏡下，吸取圓、實(shí)、大的克隆團(tuán)(10板×93個)打入事先準(zhǔn)備好培養(yǎng)基的96孔培養(yǎng)板中，放入37℃5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3天后，細(xì)胞量大約占底面積2/3，取100μl上清進(jìn)行elisa篩選。陽性克隆完全換液，加入200μl含飼養(yǎng)細(xì)胞和1％ht(sigma公司)的完全培養(yǎng)基。兩天后進(jìn)行第二次elisa篩選，陽性克隆轉(zhuǎn)入事先準(zhǔn)備好培養(yǎng)基(含飼養(yǎng)細(xì)胞和ht)的24孔板培養(yǎng)。五天后取100μl上清進(jìn)行第三次elisa篩選，陽性克隆逐次轉(zhuǎn)入6孔板和細(xì)胞培養(yǎng)瓶擴(kuò)大培養(yǎng)并凍存。黑龍江作用dMMR抗體檢測試劑口碑推薦【邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)】開發(fā)的dMMR抗體檢測試劑,檢測費(fèi)用低,技術(shù)成熟,臨床易開展。

    將培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)接到500mllb液體培養(yǎng)基混合，37℃，200rpm，培養(yǎng)至od＝，iptg()低溫過夜誘導(dǎo)。400ml大離心筒，6000rpm，離心5min收集菌體，棄上清。沉淀用20-30ml10mmtris-hcl()和終濃度為，超聲破碎菌體。12000rpm離心20分鐘，取離心上清上樣到ni-nta鎳柱(qiagen)進(jìn)行純化，之后分別用含15mm咪唑、60mm咪唑、300mm咪唑的10mmtris-hcl()(含)溶液洗脫，分別收集蛋白峰，電泳檢測，備用；所制備的重組蛋白，蛋白濃度為，純度為80％。圖1為純化后重組msh6蛋白的電泳結(jié)果圖,其中m：分子量標(biāo)記、1：：、實(shí)施例2abm58060-20a2-pu雜交瘤細(xì)胞系的建立一、免疫將實(shí)施例1中的重組蛋白用弗氏完全佐劑(sigma公司，f5881)乳化，免疫icr小鼠(購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司)，腹部皮下注射每只小鼠6點(diǎn)，劑量為60μg/只。每14天加強(qiáng)免疫一次，抗原使用弗氏非完全佐劑(sigma公司，f5506)乳化，劑量為30μg/只。第3次加強(qiáng)免疫后7天，msh6-1蛋白，2ug/ml，4℃包被過夜，elisa檢測小鼠血清中抗免疫原的多抗效價(jià)，效價(jià)比較高的小鼠以尾靜脈注射沖擊免疫，抗原用生理鹽水混勻，劑量為50μg/只。二、細(xì)胞融合：無菌制備免疫達(dá)標(biāo)的小鼠脾細(xì)胞懸液，與小鼠骨髓瘤細(xì)胞sp2/0。

    微衛(wèi)星不穩(wěn)定），不推薦氟尿嘧啶類藥物的單藥輔助化療。四、PIK3CA/PIK3CB磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）是PI3K/AKT信號通路中的關(guān)鍵分子，PIK3CA/PIK3CB為PI3K的亞單位，研究表明其表達(dá)異常導(dǎo)致PI3K/AKT細(xì)胞信號通路的異常，在結(jié)直腸ai的發(fā)***展中有重要的作用，其還與MDR1、MRP1介導(dǎo)的多藥耐藥存在密切聯(lián)系。1.預(yù)測西妥昔單抗療效有多項(xiàng)臨床回顧性研究證明PIK3CA基因突變狀態(tài)與西妥昔單抗的療效密切相關(guān)，PIK3CA基因突變的患者，西妥昔單抗療效低，反之療效高，但PI3KCA在西妥昔單抗靶向***大腸ai中的具體調(diào)控機(jī)制尚不清楚。2.評估預(yù)后2014年KishikiT等發(fā)現(xiàn)在KRAS野生型的結(jié)直腸ai患者中，攜帶PIK3CA突變的患者疾病控制率較低，PFS較野生型患者短（HR：；95%CI：；P＜），OS也較野生型短（HR：；95%CI：；P＜）。另外一項(xiàng)發(fā)表在JCancerResClinOncol對839名接受抗EGFR***的mCRC病人的Meta分析研究發(fā)現(xiàn)，攜帶PIK3CA突變的患者PFS更短。因此PIK3CA與大腸ai發(fā)***展及多藥耐藥性具有密切關(guān)系，其高表達(dá)不*會導(dǎo)致傳統(tǒng)化療耐藥，并且與EGFR靶向***密切相關(guān)。其高表但仍有許多難題有待克服，特別是針對PIK3CA、PIK3CB突變、耐藥等機(jī)制的研究。邁杰多平臺的研究優(yōu)勢以及多組學(xué)數(shù)據(jù)的挖掘能力，促進(jìn)產(chǎn)學(xué)研醫(yī)結(jié)合，加速項(xiàng)目成果轉(zhuǎn)化，創(chuàng)新科技產(chǎn)品研發(fā)。

    目前較常使用的檢測技術(shù)為聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）和免疫組化（IHC）檢測[4]。PCR檢測，目前公認(rèn)的標(biāo)志物套餐由BAT25、BAT26、NR21、NR24、NR22或NR27組成。當(dāng)檢測的微衛(wèi)星標(biāo)志物中沒有發(fā)現(xiàn)異常，標(biāo)本定義為微衛(wèi)星穩(wěn)定性（MSS）；如果有一個標(biāo)志物或低于40%的標(biāo)志物顯示異常，則標(biāo)本被認(rèn)定為低水平微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI-L)；當(dāng)測試標(biāo)志物的40%或超過40%異常時，標(biāo)本被認(rèn)定為高水平微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MSI-H）。免疫組化檢測，建議使用PMS2、MSH6、MLH1和MSH2的抗體套餐來檢測MSI現(xiàn)象。判讀標(biāo)準(zhǔn)如下：在對照組織（即liu周圍的正常上皮細(xì)胞、liu內(nèi)浸潤的淋巴細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞均出現(xiàn)細(xì)胞核著色）中----強(qiáng)陽性表達(dá)的前提下，只要MMR蛋白在liu細(xì)胞出現(xiàn)核著色（），即判定該蛋白為陽性表達(dá)；若MMR蛋白在liu細(xì)胞未出現(xiàn)核著色現(xiàn)象（—）則視為MMR蛋白缺失[5,6]。當(dāng)四個錯配修復(fù)蛋白均表達(dá)時，可判定為MSS；當(dāng)四個錯配修復(fù)蛋白中只有一個發(fā)生表達(dá)缺失時，可判定為MSI-L；當(dāng)四個錯配修復(fù)蛋白2個或以上表達(dá)缺失時，可判定為MSI-H。已確定4種MMR蛋白對MSI-H的敏感性、特異性均接近100%。4林奇綜合征（Lynch綜合征）的發(fā)病機(jī)制和臨床特征林奇綜合征是指因錯配修復(fù)基因。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)針對藥物研發(fā)過程中靶點(diǎn)、適應(yīng)癥及PD研究中生物標(biāo)志物等研究的進(jìn)行方案開發(fā)設(shè)計(jì)。黑龍江作用dMMR抗體檢測試劑口碑推薦

邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)嚴(yán)格按照IS013485標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定建立質(zhì)量體系。黑龍江作用dMMR抗體檢測試劑口碑推薦

    發(fā)明人還提供上述任一所述的抗msh6蛋白單克隆抗體，在msh6蛋白免疫檢測中的用途。進(jìn)一步地，所述免疫檢測包括免疫組織化學(xué)法，免疫印跡法和酶聯(lián)免疫法。區(qū)別于現(xiàn)有技術(shù)，上述技術(shù)方案依據(jù)msh6蛋白、抗原性、組成氨基酸的親疏水性以及二級結(jié)構(gòu)，選擇msh6蛋白第1-100位氨基酸序列與gst蛋白融合表達(dá),其dna編碼序列為seqid**,用大腸桿菌進(jìn)行表達(dá)，得到免疫原。對小鼠進(jìn)行免疫，經(jīng)細(xì)胞融合、篩選和亞克隆，獲得高效分泌抗msh6蛋白單克隆抗體的單克隆細(xì)胞系abm58060-20a2-pu,以及由該細(xì)胞系所分泌的抗msh6蛋白單克隆抗體。本方案得到的抗體具有高特異性、敏感性，可以特異性識別表達(dá)msh6蛋白的細(xì)胞，適用于免疫學(xué)檢測，特別是免疫組化檢測?；旧Y(jié)果圖(左為abm58060-20a2-pu分泌的msh6，右為市售msh6)。具體實(shí)施方式實(shí)施例1重組msh6蛋白片段的制備一、抗原片段選擇依據(jù)uniprot中登錄號為p52701的蛋白質(zhì)序列進(jìn)行序列和二級結(jié)構(gòu)分析，全長為1360個氨基酸長度的msh6蛋白含有muts超家族區(qū)域，其分子量約為152kda左右，依據(jù)通過在線服務(wù)器測的蛋白的二級結(jié)構(gòu)(secondarystructure)和表面可及性(surfaceaccessibility)參數(shù)，并通過對其抗原性指數(shù)(jamesonba,:(1):181-6.)的分析結(jié)果。黑龍江作用dMMR抗體檢測試劑口碑推薦