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ProSpec是一家全球細胞因子蛋白及相關抗體生產和研發品牌。ProSpec的生產和研發工廠位于以色列,專注于蛋白(重組及合成)生產研發,其獨有的細菌和哺乳動物表達和蛋白折疊技術使其能在17年內成長為國際的科研級蛋白供應商。目前ProSpec可以提供細胞因子,生長因子,信號蛋白,病毒抗原等近800種重組蛋白和100多種抗體,是世界上提供蛋白品種多的公司之一,其生產工藝和規模使其可以提供毫克到克級蛋白,價格優于同類公司。絕大部分產品是天然成熟型蛋白,而不含有標簽蛋白。考慮到大部分研究者希望能更靈活地配制蛋白溶液,ProSpec-Tany絕大部分產品沒有添加保護劑或鹽,這就對工藝提出了更高的要求。同時,ProSpec-Tany絕大部分產品為凍干粉,因此易于運輸和保存。重組蛋白的生物學活性定義。ProSpecWnt3重組蛋白
哺乳動物蛋白表達系統在生產重組蛋白中的應用中,優勢明顯。具體表現為以下方面,能實現翻譯后修飾及正確的蛋白折疊復性:哺乳動物為真核細胞,細胞器可以對蛋白正確折疊加工。表達水平高:載體可在哺乳動物細胞中高表達重組蛋白,表達量可高達1-3g/L。蛋白表達高效穩定:高效啟動子控制,穩定表達,并可以選擇多種表達,如瞬時表達、穩定細胞株表達、營養缺陷型細胞株表達(DHFR/GS)、大規模懸浮細胞表達等。適合大規模蛋白表達:常用的哺乳動物表達宿主細胞(HEK293和CHO),使用懸浮細胞培養,可以在一個月內可產生數克級蛋白。ProSpecWnt3重組蛋白外企的重組蛋白藥物占據了全球將近60%的醫藥市場份額。
重組蛋白含與不含 CF 有什么區別?CF,是 Carrier Free 的意思。一般來說,為了對重組蛋白的結構及活性進行保護,生產廠家會在蛋白產品中添加牛血清白蛋白(BSA)作為載體蛋白。但考慮到 BSA 會對某些實驗造成影響,廠家又研發出不含載體蛋白(BSA)的產品,即 Carrier Free 蛋白。客戶如何選擇呢?在用途上,一般情況下,我們建議使用含有 BSA 的重組蛋白用于細胞或組織培養,或作為 ELISA 標準品。相對而言,當 BSA 可能會干擾實驗時,比如體內實驗、蛋白標記等,則推薦使用 CF 蛋白。另外,如果實驗平臺有特殊要求,也應根據要求選擇不含 BSA 的蛋白。
重組蛋白的活性低是讓科研工作者十分頭疼的難題,買來的重組蛋白活性低怎么辦?除了重組蛋白自身存在質量問題外,它可能只是需要一個“搭檔”。在某些重組蛋白在使用時,需要加入交聯抗體,進行交聯(Cross-linking)反應后才能表現出高活性,發揮出功能。其原理是,交聯反應能夠將重組蛋白的受體相互拉近,因為每個標簽抗體含有兩個抗原結合臂,從而能夠使兩個含標簽蛋白 - 受體復合物拉近,進而指數級放大下游信號,提升刺激的效率(表現為更低的 ED50 值)。眾所周知,在同一實驗中 ED50 越低表明著活性越高。重組蛋白藥物的發展動態。
重組蛋白的生化和生物學特性對于選擇表達策略來說是必須要考慮的,可以通過它們對表達結果和產物的可溶性做出初步預測。通過分析一級序列可以整合一組屬性用以預測二級結構、生物學定位 (細胞膜、細胞質、周質腔或胞外)、家族歸類 (折疊和結構域) 及推斷生化性質 (等電點、無序區域、配基)。目標蛋白質的一些特征,如極可能存在的跨膜螺旋,可能要求必須使用為表達膜蛋白設計的系統,或需要使用克隆單個結構域的策略以表達蛋白質的可溶部分。使用目標蛋白質的特征來指導表達宿主的選擇和載體的構建有助于獲得成熟的、定位適當的蛋白質。可以使用目標蛋白質或同源蛋白質的實驗數據和歷史數據對序列信息加以補充,從而有助于表達系統的進一步優化。例如,已知某蛋白質需要某種輔基以保持正確的功目旨,那就必須選擇特定的宿主以確保獲得具有完整功能的表達產物。國產重組蛋白種類多,性價比高。ProSpecWnt3重組蛋白
選擇合適的重組蛋白表達系統,至關重要。ProSpecWnt3重組蛋白
客戶購買的重組蛋白一般為裝在塑料管中的凍干粉,凍干粉在運輸過程中可能會因顛簸而漂散并粘貼于管壁或管蓋上,所以在打開塑料瓶蓋前,需將凍干粉通過離心收集到管底,以便用很小體積的液體即可將凍干粉完全溶解。那么應該用多少轉速、多長時間離心試劑管,才能達到良好的收集效果?答:有些小型高速離心機(多為進口品牌)的面板上有一個Spin鍵,按了此鍵后,離心機會自動快速上升到速度(10000rpm或12000rpm),上升后速度即刻下降,直至停止旋轉,整個過程大約30s。這個Spin鍵足以很好的將細胞因子或蛋白收集到管底。但有些實驗室沒有這樣的高速離心機,只有轉速為4000-4500rpm的離心機。這種情況下,需3000-3500rpm離心5min,也能達到類似的效果。ProSpecWnt3重組蛋白
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