免疫組織化學的方法具有方便、快捷、穩定等優點并且對Lynch綜合征的確診具有指向性，因此被***接收，目前已幾乎替代前者。上述MSI的傳統檢測方法不能用于對Lynch綜合征的確診，而免疫組織化學方法因直接檢測相關蛋白對Lynch綜合征具有***的指向性。為了提高對Lynch綜合征的指向性，有學者建議將EpCAM列入錯配修復蛋白檢測行列。然而對Lynch綜合征的確診必需依賴于對MLH1、MSH2、MSH6、PMS2以及EpCAM基因進行突變或缺失的檢查結果。四、錯配修復蛋白染色錯配修復蛋白染色結果判斷應注意以下幾點:1）著色部位是否為核；2）內對照（上皮細胞：正常腸上皮特別是腺體基底部細胞；間質細胞：淋巴細胞、平滑肌細胞、血管內皮細胞等）是否陽性；3）**細胞的細胞核是否為陽性（通常任何**細胞表達即判斷為該錯配修復蛋白陽性）錯配修復蛋白結果解讀:一種或多種錯配修復蛋白表達缺失提示為MSI-H**。通常MLH1功能缺陷會合并PMS2表達缺失，而MSH2缺陷則常合并MSH6表達缺失，反之不然。【邁杰轉化醫學】開發的dMMR抗體檢測試劑,檢測費用低,技術成熟,臨床易開展。陜西定制dMMR抗體檢測試劑

    每孔加50μl含％abts(southernbiotech公司)和％h2o2的檸檬酸緩沖液()進行顯色反應，10-20min內測定405nm波長下的od值。結果顯示，本發明單克隆抗體為igg2b型鼠源單克隆抗體。二、親和常數測定包被msh6重組蛋白，包被濃度為2μg/ml,100μl/孔，4℃包被過夜，pbs-t洗3次。每孔加200μl封閉液37℃封閉2h，pbs-t洗3次。實施例4中純化的單克隆抗體，從1：200開始2倍梯度稀釋，***1孔留空白對照，37℃孵育1h，pbs-t洗3次。hrp標記的羊抗鼠二抗1：20000稀釋，每孔100μl，37℃孵育1h，pbs-t洗3次。每孔加入100μl含％tmb(sigma公司)和％h2o2的檸檬酸-磷酸緩沖液顯色10min，加50μ。用酶標儀測定波長450nm的吸光值。畫出od值對應抗體稀釋倍數的曲線，找出≥1/2“平臺od值”對應的稀釋倍數a。利用下列公式計算出親和常數為×109。三、單抗反應特異性和應用效果選擇msh6重組蛋白，用免疫印跡的方法檢測本發明單克隆抗體的識別特異性，免疫印跡實驗過程如下：每種蛋白上樣約5-10ng，進行12％聚丙烯酰胺凝膠電泳。按常規方法在bio-rad電轉移系統中將凝膠蛋白帶轉移到pvdf膜上(millipore公司)。將膜置于含5％脫脂奶粉的tbs-t封閉液中4℃過夜。加入單克隆抗體msh6。陜西定制dMMR抗體檢測試劑邁杰轉化醫學擁有豐富的伴隨診斷開發經驗，高質量的管理體系和高素質的研發團隊。

    對細胞表面和細胞內的各種抗原成分進行定位研究。免疫酶標技術是目前*常用的技術。本方法與免疫熒光技術相比的主要優點是：定位準確，對比度好，染色標本可長期保存，適合于光、電鏡研究等。免疫酶標方法的發展非常迅速，已經衍生出了多種標記方法，且隨著方法的不斷改進和創新，其特異性和靈敏度都在不斷提高，使用也越來越方便。目前在病理診斷中廣為使用的當屬***法、ABC法、SP法等。3、免疫膠體金技術免疫膠體金技術是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩定地吸附蛋白，對蛋白的生物學活性則沒有明顯的影響。因此，用膠體金標記一抗、二抗或其他能特異性結合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針，就能對組織或細胞內的抗原進行定性、定位，甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒，且膠體金的電子密度高，所以免疫膠體金技術特別適合于免疫電鏡的單標記或多標記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色，因此也適合進行光鏡觀察。如應用銀加強的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。四、免疫組化技術的優點1、特異性強免疫學的基本原理決定了抗原與抗體之間的結合具有高度特異性，因此。

    ％的MLH1啟動子甲基化或MLH1表達缺失的結直腸ai中存在BRAF基因V600E突變，而且除極個別報道外，BRAF突變幾乎從不發生在Lynch綜合征相關結直腸ai中，因此檢測liu是否存在MLH1啟動子甲基化和BRAF基因V600E突變可作為區分散發性MSI-H結直腸ai與Lynch綜合征相關結直腸ai的重要參數。2．MSI-H結直腸ai的臨床病理特征：Lynch綜合征相關性結直腸ai與散發性MSI-H結直腸的臨床病理特征大致相同。與MSS結直腸ai相比，MSI-H結直腸ai好發于右半結腸，組織學類型以黏液腺ai和低分化腺ai多見，liu內有明顯的上皮內淋巴細胞浸潤(tumorinfiltratinglymphcytes，TIL)，較少見到腺腔內壞死，liu邊緣呈膨脹性浸潤，周圍可見Crohn病樣淋巴細胞聚集(圖1)，淋巴結轉移發生率較低。相對于Lynch綜合征，散發性MSI-H結直腸ai發病年齡較大，女性相對多見，更易發生在右半結腸。圖1MSI-Hliu的形態特點；liu呈低分化或伴黏液分化，伴***的上皮內淋巴細胞浸潤(A，HE中倍放大)，liu前緣呈膨脹性浸潤，周圍見Crohn病樣淋巴細胞聚集灶(B，HE低倍放大)盡管MSI-H結直腸ai的病理特征與MSSliu存在一定差別，但除TIL外，其他形態指標的特異性和敏感性均較低，即使結合發病年齡等因素(<60歲)。邁杰與大學，研究院所，醫院的科研人員進行科研轉化研究合作,包括基礎科學研究及臨床應用研究等。

    與無突變的結直腸ai相比，BRAF突變型CRC患者的年齡偏大，女性居多，微衛星不穩定可能性大、組織級別高，淋巴結轉移率和局部晚期發生率高。術后輔助***后，BRAF突變型CRC的無病生存期更短，復發后的總生存期更差。PETACC-3研究檢測了1404例Ⅱ~Ⅲ期結腸ai患者的BRAF和KRAS突變，結果顯示，BRAF突變型患者的總生存劣于野生型患者。當根據微衛星不穩定分層后，這種差異更加明顯。PETACC8和N0147試驗的匯總分析提示WT組，BRAF突變組的中位SAR分別為，和，其中BRAF突變組（HR：：，P＜），提示BRAFV600E是TTR，SAR和OS的**預測因子。在以后的臨床試驗輔助試驗中應將這些突變納入為重要分層因素。2.評估Lynch綜合癥Lynch綜合癥的機制通常是胚系MMR的缺失，SepulvedaAR等報道BRAFV600突變在胚系MMR缺失的患者中很少發生，但在具有表現得MMR缺失患者中被報道有高達3/4的患者具有BRAFV600E突變。因此BRAF突變可作為區分胚系與表現dMMR的手段，特別是MLH1缺失的情況下，進一步評估Lynch綜合癥。三、MSI/MMR大量研究表明，微衛星不穩定（MSI）是由錯配修復（MMR）基因發生缺陷引起的，當錯配修復系統功能異常時，微衛星出現的復制錯誤得不到糾正并不斷累積。邁杰轉化醫學圍繞生物標志物研究、伴隨診斷開發，建立了完善的核酸組學、蛋白組學、細胞組學技術平臺。陜西定制dMMR抗體檢測試劑

經多平臺平行驗證（MSI-PCR、MSI-NGS)，一致性高，特異性好.陜西定制dMMR抗體檢測試劑

    3）當樣本為MSH6或PMS2蛋白缺失的MSI-L時，可能是Lynch綜合征的罕見表型，建議進一步確診。由于所有MMR蛋白的核染容易識別，且周圍間質組織就可作為內對照；同時IHC檢測具有操作簡單、價格便宜和可以迅速拿到檢測結果等優點，所以目前IHC檢測已經替代PCR檢測成為林奇綜合征的初步篩選方法，或在PCR檢測之后找出缺失的MMR蛋白。MSI對結直腸ai化療和預后的預測意義結直腸ai的化療而言，有大量的研究表明MSI狀態對于決定結直腸ai患者是使用5-FU***還是伊立替康***很重要。一項林奇綜合征患者長期隨訪的回顧性研究，根據MSI狀態進行評價，證實5-FU輔助***可使MSI-L和MSS患者生存得到改善。然而，在MSI-H患者術后5-FU輔助***并沒有顯示出有統計學意義的效果，相反5年生存率低于那些*接受手術***的患者[11]。同時，MSI患者比起MSS患者對伊立替康的***更為敏感。根據上文所述，MSI的發生，與MMR基因缺失有關，因此NCCN結直腸ai小組建議計劃單獨使用5-FU進行輔助***的Ⅱ期結直腸ai患者需進行MSI檢測。結直腸ai的預后而言，一項匯集32項研究的薈萃分析表明：MSI患者生存期更長、病死率更低(不易發生liu復發及淋巴結轉移)[12]。鑒于MMR基因在結直腸ai***和預后方面的***影響。陜西定制dMMR抗體檢測試劑