蟾蜍靈（bufalin）是中藥蟾酥中的主要成分之一，研究表明其可誘導多種肝ai細胞自噬。蟾蜍靈可激huo肝aiHepG2細胞自噬和凋亡，增強自噬Beclin-1（BECN-1）的表達，促進I型微管相關蛋白1輕鏈3（LC3-I）向II型微管相關蛋白1輕鏈3（LC3-II）的轉化，抑制p62和mTOR信號通路表達，AMPK抑制劑可降低蟾蜍靈誘導自噬的作用，提示蟾蜍靈誘導的自噬作用可能是AMPK-mTOR依賴性的。蟾蜍靈可通過抑制Akt/mTOR通路，上調LC3-II、Beclin-1、Atg5、Atg7和Atg12蛋白的量，誘導SK-HEP-1細胞自噬性死亡。此外，蟾蜍靈還可誘導Huh7、Hep3B和HA22T細胞自噬，抑制細胞增殖，使細胞阻滯在G2/M期，其誘導自噬的機制可能與激huoJNK通路，上調中流壞死因子（TNF）、BECN-1、Atg8水平相關。細胞內游離鈣離子濃度的增加和線粒體膜電位的減少也能誘導細胞自噬的發(fā)生。杭州自噬

自噬發(fā)生過程：在此過程中，自噬體的形成是關鍵，其直徑一般為300~900nm，平均500nm，囊泡內常見的包含物有胞質成分和某些細胞器如線粒體、內吞體、過氧化物酶體等。與其他細胞器相比，自噬體的半衰期比較短，只有8min左右，說明自噬是細胞對于環(huán)境變化的有效反應。在整個自體吞噬過程中,細胞質和細胞器都受到破壞,較明顯的是線粒體和內質網(wǎng)受損。雖然自體吞噬并不直接破壞細胞膜和細胞核,但是有證據(jù)表明,在較初斷裂或消化后,細胞膜和細胞核會然后變成溶酶體以消化和分解自身。杭州自噬誘導與吞噬泡形成：為應對多種刺激，通過形成一種獨特的平整細胞膜（吞噬泡）誘導自噬。

2005年，Lemaster提出線粒體自噬的概念:細胞利用自噬活動的選擇性，通過自噬溶酶體清chu細胞內衰老、損傷或功能障礙的線粒體，維持細胞內線粒體質量和數(shù)量的穩(wěn)定。線粒體自噬是一種選擇性自噬現(xiàn)象，參與調節(jié)細胞內穩(wěn)態(tài)，與細胞發(fā)揮正常功能密切相關。近年來，線粒體自噬在肝臟疾病、糖尿病、心血管疾病、帕金森綜合征等疾病中的研究取得了突破性進展。線粒體自噬是復雜的生理過程，在不同細胞中有多種誘導和調控機制，如酵母中的自噬相關基因(autopahgyrelatedgenes，Atg)家族蛋白誘導的調控機制及網(wǎng)織紅細胞中NIX(Nip3-likeproteinX)介導的線粒體自噬機制等。

自噬雙標系統(tǒng)的工作原理為：未發(fā)生自噬的細胞及含有自噬體的細胞中，由于mCherry與GFP共同表達，細胞呈現(xiàn)黃色熒光。當自噬體與溶酶體融合形成自噬溶酶體后，酸性的溶酶體環(huán)境使酸敏感的GFP熒光淬滅，而mCherry不受影響，進而使自噬溶酶體呈現(xiàn)紅色熒光。因此，紅色熒光可指示自噬溶酶體形成的順利程度。紅色熒光越多，綠色熒光越少，則從自噬體到自噬溶酶體階段流通得越順暢。反之，自噬體和溶酶體融合被阻止，自噬溶酶體進程受阻。自噬阻止劑可以通過阻止自噬通路中的某種蛋白來實現(xiàn)阻止自噬，也可以通過直接擾亂溶酶體功能來阻止自噬。

自噬是一系列自噬體結構演變的過程，由自噬相關基因(autophagy-relatedgene,ATG)執(zhí)行精細的調控。在饑餓、低氧、藥物等因素作用下，待降解的細胞成分周圍會形成雙層結構分隔膜，隨后分隔膜逐漸延伸，較終將待降解的胞漿成分完全封閉形成自噬體(autophosome)；自噬體形成后將通過細胞骨架微管系統(tǒng)運輸至溶酶體，二者融合形成自噬溶酶體(autopholysome)；較終其內容物在溶酶體酶作用下被細胞降解利用。目前研究發(fā)現(xiàn)自噬調節(jié)涉及多種信號通路，其中以腺苷單磷酸活化蛋白激酶(adenosinemono-phosphateactivatedproteinkinase,AMPK)及哺乳動物雷帕霉素受體(mammaliantargetofrapamycin,mTOR)信號通路為調控中心。AMPK促進自噬發(fā)生，而mTOR阻止自噬發(fā)生。此外，許多經(jīng)典的凋亡信號通路或蛋白被發(fā)現(xiàn)與自噬調控之間存在著復雜的交織。L-NAME抑制NO產(chǎn)生能活化自噬, 促進突變Htt 降解并減輕聚集突變蛋白的毒性作用。杭州自噬

融合、降解與回收：完全形成的自噬體與溶酶體在細胞內相融合。杭州自噬

自噬在病變發(fā)生的不同階段扮演了完全不同的角色。作為正常細胞生命活動所必需的一種過程，自噬水平低下可導致細胞病變。例如，在胃病和結腸病等病變細胞中，經(jīng)常可觀察到和Beclin-1密切相關的蛋白BIF-1突變或缺失，而Beclin-1是自噬信號通路中的一種關鍵蛋白。在小鼠模型中，敲除自噬相關蛋白Atg7和Atg5可誘發(fā)肝病。進一步研究表明，自噬可以清理受損線粒體，從而避免受損線粒體產(chǎn)生大量活性氧，而活性氧可以對DNA等遺傳物質造成損傷進而致病。從這個角度來說，在一些病變發(fā)生的早期，促進自噬可能是一條可行的抗病變途徑。杭州自噬