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蛋白質組學常用技術:非靶向蛋白組學:蛋白質定性(膠條鑒定和溶液鑒定),高通量定量蛋白組(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽組學。蛋白質組研究技術在研究對象上,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動物等范圍。蛋白質組學主要以全蛋白組(組織、細胞)、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對象,通過對蛋白組進行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學功能、作用機制、疾病診斷的標志物以及預測蛋白的上、下游變化關系。蛋白質組學可以克服核酸水平預測的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。蛋白質組與基因組相對應,也是一個整體的概念。廣州蛋白質組學報價
蛋白質組學與基因組學的差異:蛋白質組和基因組(genome)在概念上有相關性,某一個蛋白質組的蛋白質是由其基因組所編碼的,然而蛋白質組學和基因組學在研究對象和研究方法上有很大的區別。基因組在所有的細胞中幾乎都是完整的,與之不同,蛋白質組具有很高的細胞和組織特異性,不同的細胞組織表達不同的蛋白質組。蛋白質組的復雜性也遠遠高于基因組,這是因為一個基因≠一個轉錄產物≠一個蛋白質。比如據估計人的基因組由30000個基因組成,經mRNA剪切和蛋白質翻譯后修飾將產生20萬~200萬個蛋白質。由于不同的轉錄起始和mRNA剪切使同一基因產生了不同的轉錄產物。同樣由于不同的翻譯起始,一個mRNA可以翻譯成不同的蛋白質。廣州蛋白質組學報價蛋白質組學的研究方法將出現多種技術并存,各有優勢和局限的特點。
Label Free 非標記定量蛋白質組學技術優點:無需標記,比較大程度的保留樣本的真實性;可以區分“有”、“無”蛋白;不受標簽數量的限制,多個樣本可以同時進行蛋白定量分析;不同物種和不同的樣本類型可以同時開展蛋白定量分析;處理步驟簡單,成本低。 DIA 定量蛋白質組學:數據非依賴性采集(DIA)是一種明顯提升蛋白質組學研究通量和可重復性的技術。經典的 DIA 流程通常依賴于 DDA 譜圖庫的構建,需要消耗大量的樣品,且周期長,成本高。越來越多的不依賴于 DDA 建庫的分析方法相繼誕生。
PRM靶向蛋白質組學:是一種基于Orbitrap為表示的高分辨、高精度質譜的離子監視技術,首先利用四級桿質量分析器的選擇能力,用Q1選擇目標肽段的母離子,隨后在collisioncell中對母離子進行碎裂,然后利用Orbitrap分析器在二級質譜中檢測所選擇的母離子窗口內的所有碎片信息。這樣能夠對目標蛋白質、目標肽段(如發生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測,即可對目標蛋白質/肽段進行相對(一定)定量。隨著質譜、系統生物學、生物信息學等相關學科的發展,我認為今后我們會更多地在現實生活中見到蛋白質組學相關的應用。如定量胰島素、鑒定血紅蛋白氨基酸突變(鐮刀形紅細胞癥)、糖化血紅蛋白比例測定等。從測試體量估計,應該遠小于1%的ELISA測試量。蛋白質組學現已被普遍應用于生命科學研究領域。
蛋白質組學技術方法介紹:蛋白質組學技術方法:生物質譜:生物質譜技術是蛋白質組學研究中比較重要的鑒定技術,其基本原理是樣品分子離子化后,根據不同離子之間的荷質比(M/E)的差異來分離并確定分子量。對于經過雙向電泳分離的目標蛋白質用胰蛋白酶酶解(水解Lys或Arg的-C端形成的肽鍵)成肽段,對這些肽段用質譜進行鑒定與分析。目前常用的質譜包括兩種:基質輔助激光解吸電離-飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)和電噴霧質譜(ESI- MS)。在對早老性癡呆等人類重大疾病的臨床診斷和治理方面蛋白質組技術也有十分誘人的前景。廣州蛋白質組學報價
蛋白質組學技術的發展已經成為現代的生物技術快速發展的重要支撐。廣州蛋白質組學報價
蛋白組學常見研究模式主要有兩種:1.通過蛋白質組學尋找疾病發生的發展的新型標志物;2.結合其它組學建立疾病或者研究主題的表達譜和分子機制。蛋白質組學( proteomics) 是指系統研究某一基因組所表達的所有蛋白質,包括組成蛋白質一級結構的氨基酸序列,蛋白質的豐度,蛋白質的修飾以及蛋白質之間的相互作用。蛋白質組和基因組( genome)在概念上有相關性,表示某一個蛋白質組的蛋白質是由基因組所編碼的,然而蛋白質組學和基因組學在研究對象和研究方法上有很大的區別。廣州蛋白質組學報價
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