熒光壽命成像在生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷應(yīng)用中的許多場合都對多光譜分辨提出特殊要求，如在FRET測量中，要求能同時(shí)測量供體和受體的熒光強(qiáng)度隨時(shí)間的衰減，多光譜分辨的熒光壽命成像提供了一種新的定量研究手段．目前，基于門控像增強(qiáng)器的多光譜寬場FLIM 技術(shù)一次只能獲得至多兩個(gè)譜段的熒光壽命圖像，而基于TCSPC的多光譜分辨FLIM的成像速度又很低，這些都限制了其應(yīng)用范圍．目前的一個(gè)研究方向是，發(fā)展光譜分辨率高、成像速度快、價(jià)格低廉的多光譜分辨熒光壽命成像顯微技術(shù)。時(shí)域和頻域技術(shù)在各種熒光顯微壽命成像平臺(tái)中都有應(yīng)用。湖南開放式熒光壽命成像哪家便宜

門控探測法適用于單組分熒光強(qiáng)度衰減的測量和熒光壽命成像。熒光壽命可通過在兩個(gè)不同延遲時(shí)刻開啟的相同寬度的門內(nèi)記錄的熒光強(qiáng)度信息求得，通常情形下，在條件允許的情況下，采用多門控探測，即選取多個(gè)窗口獲取多幅圖像（通常為5~10幅）來反演壽命圖像。一般使用門控微通道板像增強(qiáng)器（MCP Intensifier）或者增強(qiáng)型CCD（Intensified CCD）相機(jī)，實(shí)現(xiàn)樣品的寬場（full-field）熒光壽命成像。通過在樣品受到超短光脈沖激發(fā)后的不同時(shí)刻（時(shí)間窗口）選通像增強(qiáng)器或CCD相機(jī)，獲得一組熒光強(qiáng)度圖像，然后利用公式，逐點(diǎn)計(jì)算出樣品上各點(diǎn)的熒光壽命并成像。湖南開放式熒光壽命成像哪家便宜熒光壽命成像主要通過TCSPC技術(shù)實(shí)現(xiàn)。

與熒光光譜一樣，熒光壽命也是熒光物質(zhì)的一種內(nèi)在特有性質(zhì)，不受熒光物質(zhì)濃度、激發(fā)光強(qiáng)度等因素的影響。熒光壽命成像能在不受熒光強(qiáng)度影響因素影響的條件下，在納米分辨率水平對蛋白互作進(jìn)行研究，或者通過 FRET 探針研究分子環(huán)境變化，更重要的是其測量數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性高、易重復(fù)。通過熒光壽命成像還可以對樣本所處的微環(huán)境進(jìn)行檢測、對樣品組份進(jìn)行分離等等。在傳統(tǒng)的熒光強(qiáng)度和熒光光譜兩個(gè)維度的基礎(chǔ)上，又增加了熒光壽命這一新的成像維度，大幅度拓展了該系統(tǒng)的應(yīng)用范圍。

在使用TCSPC測量熒光壽命的過程中，需要調(diào)節(jié)樣品的熒光強(qiáng)度，確保每次激發(fā)后較多只有一個(gè)熒光光子到達(dá)終止光電倍增管。TCSPC方法的突出優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高、測量結(jié)果準(zhǔn)確、系統(tǒng)誤差小。采用該技術(shù)對樣品進(jìn)行熒光壽命成像時(shí)，必須逐點(diǎn)測量樣品的熒光壽命，而每一點(diǎn)的測量時(shí)間又比較長，因此，通常認(rèn)為該技術(shù)不太適合熒光壽命測量。不過，近年來，隨著TCSPC技術(shù)和固體超快激光技術(shù)的發(fā)展，TCSPC技術(shù)已具備快速測量熒光壽命的條件。通過與激光共聚焦顯微鏡的結(jié)合，可以對樣品進(jìn)行熒光壽命成像的測量。熒光壽命成像不受光漂白的影響。

熒光壽命成像有幾點(diǎn)優(yōu)勢：1.不需要考慮跳色的影響，從而免去了計(jì)算和去除跳色雜質(zhì)信號(hào)的麻煩；去除跳色雜質(zhì)的準(zhǔn)確性很大程度上依賴于信噪比、成像流程的設(shè)計(jì)和控制、以及跳色信號(hào)估算的算法，這些因素使得通過穩(wěn)態(tài)光強(qiáng)度測量熒光壽命成像的精確度在很多時(shí)候受到質(zhì)疑。2.穩(wěn)態(tài)光強(qiáng)度的熒光壽命成像測量很容易受熒光標(biāo)記光漂白或是激發(fā)光散射背景的影響,而這些因素對FLIM-FRET的測量影響相對較低。3.熒光壽命成像可以定量的區(qū)分參與FRET和沒有參與FRET的分子數(shù)量，這樣深入的定量分析是穩(wěn)態(tài)光強(qiáng)度方法做不到的。熒光壽命顯微成像是熒光壽命測量和熒光顯微技術(shù)的結(jié)合。湖南開放式熒光壽命成像哪家便宜

熒光壽命成像已用于骨骼和牙齒的診斷。湖南開放式熒光壽命成像哪家便宜

熒光顯微技術(shù)具有無損、非接觸、高特異性、高靈敏、高體友好以及能夠提供功能信息等突出優(yōu)點(diǎn)，一直是生命科學(xué)，尤其是細(xì)胞生物學(xué)研究的重要工具。近年來，隨著生命科學(xué)的發(fā)展，對熒光顯微技術(shù)也提出了越來越高的要求，激光技術(shù)、熒光探針標(biāo)記技術(shù)、新型熒光探測技術(shù)和成像手段的不斷發(fā)展，極大地促進(jìn)了熒光顯微技術(shù)的發(fā)展，成為推動(dòng)生命科學(xué)發(fā)展的重要?jiǎng)恿Α４送猓瑹晒怙@微技術(shù)也在成像的對比機(jī)制方面獲得了很大的進(jìn)展。超分辨(SR)成像技術(shù)的發(fā)展，也為熒光壽命成像(FLIM)的新發(fā)展提供了巨大的機(jī)遇。湖南開放式熒光壽命成像哪家便宜

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